紫外可见分光光度法

　　一、基本原理

　　紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大。 100nm、200nm、400nm、800nm、400um、1m通指X-射线、紫外区、可见区、红外区、微波区、无线电波区

　　Beer-lambert定律： A=Elc

　　A--吸收度

　　E-吸收系数

　　l ---液层厚度

　　c---溶液浓度吸收度浓度与厚度的关系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是单色光。

　　摩尔吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1mol/L , 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。

　　百分吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1%(W/V) , 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。

　　影响Beer定律因素：化学因素，光学因素

　　二、紫外--可见分光光度计：

　　主要部件：

　　1、 光源：要求光谱的光源，

　　2、 氢灯和钨灯(350nm)

　　3、 单色器：进口狭缝、准直镜、色散元件(棱镜和光栅)、聚焦透镜和出口狭缝组成。

　　4、 吸收池：用光学玻璃制成的吸收池，

　　5、 只能用于可见光区。用熔融石英(氧化硅)，

　　6、 可见紫外光区。

　　7、 检测器：光电池：(硒光电池：用于可见光；硅光电池：紫外可见光) 内阻小，光电管：内阻高，电流易放大 。

　　8、 易疲劳。

　　9、 讯号处理和显示器

　　三、定性与定量方法：

　　(一)、定性鉴别：是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。

　　1、对比吸收光谱特征数据

　　2、对比吸收度(或吸收系数)比值

　　3、对比吸收光谱的一致性

　　(二)、纯度检查：杂质检查与杂质限量检测

　　(三)、含量测定：

　　1、吸收系数法

　　2、标准曲线法

　　3、对照法